Deze eerste game in de Assassin's Creed-serie speelt zich af in 1191 na Christus. De derde kruistocht naar het Heilige Land heeft chaos veroorzaakt. Het is aan de Assassijnen de taak om het bloedvergieten te stoppen door beide partijen onder druk te zetten: de moslims en de kruisvaarders. In het spel neem je de rol van het één van deze Assassijnen: Altaïr. Als Altaïr moet je verscheidene smerige klussen opknappen met behulp van Middeleeuwse tactieken en wapens.

In Assassin's Creed is het de kunst om iemand zo onopvallend mogelijk te doden en ervoor te zorgen dat je zelf niet gegrepen wordt. Je moet je aanvallen goed plannen, zonder genade toeslaan en ontsnappen. Dit is vaak moeilijker dan het klinkt, doordat je omgeving reageert op je acties. Als jij iemand in het openbaar vermoord, zullen de mensen in je omgeving bijvoorbeeld van je wegrennen. Je kunt deze mensen ook juist gebruiken door tussen ze te gaan lopen en zo onzichtbaar te worden voor je vijanden. Assassin's Creed: Director's Cut Edition bevat vier exclusieve missies, waaronder Archer Stealth Assassination Challenge en Rooftop Race Challenge. In die laatste moet je over de daken binnen een bepaalde tijd naar een informant rennen.